StemSure® 細胞凍存液

人iPS 細胞·小鼠 ES 細胞凍存用

StemSure^® 細胞凍存液 Update！！

　　本產(chǎn)品是可用于凍存以小鼠 ES 細胞為代表的各種通用細胞株的無血清型細胞凍存液。含 BSA 和 10% DMSO 。標(biāo)準(zhǔn)測試中用小鼠 ES 細胞 D3 株凍存、復(fù)蘇，確認其細胞存活率。本產(chǎn)品采用緩慢凍存法凍存細胞，無需使用程序降溫盒。

　　使用本產(chǎn)品對小鼠 ES 細胞 D3 株在 -80℃ 進行保存，可凍存２年；普通細胞在 -150℃ 下可凍存 30 個月，并且可維持很高的存活率。

　　另外，本產(chǎn)品已確認可用于凍存人 iPS 細胞。

◆特點

●  可在維持人 iPS 細胞、小鼠 ES 細胞未分化能力的狀態(tài)下，直接進行凍存。

●  可在 -80℃ 下進行長時間凍存。

●  凍存的通用動物細胞株的細胞存活率好。

●  無血清型

●  無需自行配制試劑

●  無需使用程序降溫盒

◆測試項目

●  細胞存活率時間（使用小鼠 ES 細胞 D3 株進行實驗）

●  無菌實驗

●  內(nèi)毒素實驗

●  支原體實驗

◆使用方法

人 iPS 細胞的凍存

1.    凍存

①    去除人 iP S細胞培養(yǎng)皿中的營養(yǎng)液，用 PBS 清洗后，用 Accutase 等剝離細胞。

②    添加含有 10 μmol/L Y-27632的人 iPS 培養(yǎng)基（hPSC 培養(yǎng)基（+ROCKi）），用移液器吹打成單細胞。

③    將吹打分散的細胞懸浮液移至樣本管，離心（1,000 rpm，3 min，室溫）后去除上清液。

④    添加含 hPSC 培養(yǎng)基（+ROCKi）的培養(yǎng)基，用移液器懸浮。

⑤    計算細胞數(shù)量。

⑥    以１×10⁶ cells/管分注在細胞懸浮液保存管中。

⑦    離心（1,000 rpm，3 min，室溫）后去除上清液。

⑧    使用 50 μL/管本產(chǎn)品進行懸浮，在 -80℃ 下進行凍存。

2.    復(fù)蘇

①    在凍存管中添加 hPSC 培養(yǎng)基（+ROCKi），復(fù)蘇凍結(jié)細胞（不使用溫水浴法）。

②    離心（1,000 rpm，3 min，室溫）后去除上清，再次添加 hPSC 培養(yǎng)基（+ROCKi），懸浮。

③    計算細胞數(shù)量。

④    在培養(yǎng)皿中按照２×10⁵ cells/6 cm 進行細胞培養(yǎng)。

小鼠ES細胞、通用動物細胞株的凍存

1.    凍存

①    收集細胞至樣本管中。

②    離心，去除上清。

③    在樣本管中加入本產(chǎn)品，懸浮。

④    分注至懸浮液保存管中。

⑤    將保存管在-80℃凍潔一晚。

⑥    保存于-150℃或-80℃

2.    復(fù)蘇

①    將凍存管置于37℃的水浴槽中解凍。

②    在培養(yǎng)用的培養(yǎng)基中進行懸浮。

③    離心去除上清后用培養(yǎng)基進行重懸。

④    在培養(yǎng)容器內(nèi)培養(yǎng)細胞。

◆人iPS 細胞 201B7 細胞系的凍存 Update！！

　　將人 iPS 細胞 201B7 株分散為單細胞后，在 StemSure^® 凍存液中懸浮，并在-80℃下凍存４天。反復(fù)凍結(jié)、復(fù)蘇３次之后，確認細胞存活率和各種未分化標(biāo)記（Oct3/4、Sox2、SSEA-4、Tra-1-81）的表達。

細胞生存率

未分化標(biāo)記表達的確認

◆小鼠 ES 細胞 D3 細胞系的凍存

-150℃保存（30個月）

-80℃保存（24個月）

<凍存>

①    在 1 mL本產(chǎn)品中懸浮１~2×10⁶ cells，分注至凍存管中。

②    在 -80℃凍存１天后轉(zhuǎn)移至-150℃凍存。或者在-80℃凍存。

<復(fù)蘇>

③    在37℃的溫浴槽中復(fù)蘇。

④    在細胞培養(yǎng)基中懸浮、離心。

⑤    棄上清，用細胞培養(yǎng)基重懸細胞并進行培養(yǎng)。

○確認細胞集落形成

培養(yǎng)細胞數(shù)：500個細胞/孔（含膠原蛋白涂層的６孔板）

培養(yǎng)時間：10天

◆凍存通用動物細胞系后的細胞存活率

　　用 StemSure^® 細胞凍存液凍存各種動物細胞株。可確認到凍存30個月后仍維持高存活率，且復(fù)蘇后細胞可移植。

<凍存>

①    在 1 mL本品中懸浮 1~2×10⁶ cells，分注至凍存管中。

②    在-80℃凍存1天后轉(zhuǎn)移至-150℃分別凍存２個月、４個月、30個月。

<復(fù)蘇>

③    在37℃的水浴槽中復(fù)蘇。

④    細胞培養(yǎng)用培養(yǎng)基中懸浮、離心。

★其他凍存液★

◆相關(guān)產(chǎn)品

★StemSure^® 系列★

　　本系列產(chǎn)品適用于培養(yǎng) ES 細胞和 iPS 細胞。每個批次產(chǎn)品都適用小鼠 ES 細胞 D3 細胞系進行品質(zhì)實驗檢測。

★rBC2LCN-FITC★

　　rBC2LCN 可特異性識別未分化的人ES/iPS細胞。將本產(chǎn)品添加至含有人ES/iPS細胞的培養(yǎng)液中，可對活性狀態(tài)下的未分化細胞進行染色。<詳情>

★液體培養(yǎng)基·細胞培養(yǎng)用試劑★

　　FUJIFILM Wako 充分準(zhǔn)備了以液體培養(yǎng)基為代表的ping衡鹽溶液、細胞分離·分散用溶液、抗sheng物素溶液、細胞外基質(zhì)等產(chǎn)品。<詳情>

★ES·iPS細胞研究用試劑★

　　2007年 iPS 細胞樹突發(fā)表后，許多與iPS細胞有關(guān)的文獻被發(fā)表出來。FUJIFILM Wako 推出了在各個文獻中都有所報道的與維持ES細胞·iPS細胞的未分化能和分化誘導(dǎo)相關(guān)的低分子化合物。<PDF下載>

★L(fēng)IF，人，重組體，培養(yǎng)上清★

　　LIF 具有抑制小鼠 ES 細胞分化的作用，因此可在培養(yǎng)細胞時，用來維持 ES 細胞的未分化狀態(tài)。<詳情>

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