全面檢測(cè)ALS相關(guān)SOD1突變體的混合型抗體

全面檢測(cè)ALS相關(guān)SOD1突變體的混合型抗體

Anti-SOD1（ALS-related mutants）Cocktail，Human，Rat-Mono（MS785/MS27）

本產(chǎn)品為兩種針對(duì)SOD1突變體的抗體混合物。SOD1突變體被認(rèn)為是導(dǎo)致神經(jīng)性疾病肌wei縮性側(cè)索硬化(ALS)的原因之一，本產(chǎn)品可特異性識(shí)別SOD1突變體的共通二級(jí)結(jié)構(gòu)，并且通過免疫沉淀后以Western blot或免疫染色等方法可以檢測(cè)出上百種SOD1突變體。

另外，本混合型抗體也適用于缺鋅性內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)的SOD1研究。詳細(xì)請(qǐng)瀏覽“MEMO——鋅缺乏和SOD1立體結(jié)構(gòu)變化"。

※ 本產(chǎn)品僅供研究。研究以外不可使用。

※ 本產(chǎn)品基于東京大學(xué) 藥學(xué)系研究科 細(xì)胞情報(bào)學(xué)教室的研究成果產(chǎn)品化而成。

免疫沉淀后突變體SOD1的檢測(cè)實(shí)例

在HEK293細(xì)胞中表達(dá)野生型以及不同突變型SOD1，裂解細(xì)胞后添加各抗體（MS785：5 μg/mL, MS27：2 μg/mL, MS785/MS27混合：1 μg/mL）并反應(yīng)10小時(shí)，然后使用Protein G 磁珠進(jìn)行免疫沉淀。結(jié)果顯示，MS785和MS27在經(jīng)過免疫沉淀反應(yīng)后，未識(shí)別出野生型（WT）但與突變體特異性結(jié)合。在抗原位點(diǎn)出現(xiàn)突變時(shí)，MS785和MS27無法單獨(dú)識(shí)別，但是補(bǔ)充MS785/MS27混合體后，即可檢測(cè)出來。

◆肌wei縮性側(cè)索硬化（ALS）與SOD1

肌wei縮性側(cè)索硬化(ALS；Amyotrophic Lateral Sclerosis)是一種由于運(yùn)動(dòng)神經(jīng)的細(xì)胞死亡導(dǎo)致全身骨骼肌無力、主要癥狀為肌肉wei縮的神經(jīng)退行性疾病。90%的ALS為非遺傳性發(fā)病，10%左右為遺傳性發(fā)病，并且已經(jīng)鑒定出了約20種致病基因。其中因氧化還原酶SOD1（Cu/Zn Superoxide Dismutase）的突變導(dǎo)致發(fā)病的案例最多，而表達(dá)SOD1突變體的轉(zhuǎn)基因小鼠也作為ALS的動(dòng)物模型使用。借助各種研究手段我們有望闡明由SOD1突變導(dǎo)致的ALS發(fā)病機(jī)理。

SOD1是一種在活性中心帶有銅離子與鋅離子的金屬酶，主要負(fù)責(zé)分解細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的活性氧。雖然SOD1是一種相對(duì)較小的蛋白，只有154個(gè)氨基酸（人）、分子量?jī)H為24 kDa，但是卻有著上百種突變體（圖1）。這些突變體基本不會(huì)影響分解天然活性氧的酶活性。因此，研究認(rèn)為，ALS的發(fā)病中存在著酶活性以外的其他因素，而伴隨突變的毒性獲得（toxic gain of function）被視為極有可能的因素。

原本，野生型SOD1形成二聚體，但有關(guān)SOD1突變體，東京大學(xué)一條秀憲教授等人已澄清了的以下要點(diǎn)：

●　上百種各形各式的SOD1突變體采用了與野生型SOD1不同的共通二級(jí)結(jié)構(gòu)（圖2）。

●　通過與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的蛋白降解途徑（ERAD）的構(gòu)成蛋白Derlin-1相結(jié)合獲得細(xì)胞毒性。

并且，以SOD1突變體與Derilin-1結(jié)合位點(diǎn)為基礎(chǔ)，成功開發(fā)出能夠特異性識(shí)別突變體立體結(jié)構(gòu)的大鼠單克隆抗體，克隆MS785和MS27。這些抗體作為闡明SOD1突變引發(fā)的ALS發(fā)病機(jī)制的優(yōu)秀工具備受期待。

圖1  報(bào)告中SOD1突變位點(diǎn)的案例

圖2 SOD1野生型與突變體的結(jié)構(gòu)區(qū)別以及抗體識(shí)別位點(diǎn)

◆特點(diǎn)

●　混合了抗SOD1大鼠單克隆抗體克隆MS785和克隆MS27的混合型抗體。

※　亦可分別購(gòu)入克隆MS785、MS27。

●　克隆MS785和MS27識(shí)別SOD1突變體共通的單體二級(jí)結(jié)構(gòu)，且擁有在免疫沉淀后檢測(cè)出上百種SOD1突變體的實(shí)績(jī)。

●　可以通過免疫細(xì)胞染色法特異性檢測(cè)SOD1突變體。

●　在缺鋅條件下可以檢測(cè)作為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的原因之一的野生型SOD1二級(jí)結(jié)構(gòu)變化。適用于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激研究和SOD1基礎(chǔ)研究。詳細(xì)請(qǐng)瀏覽“MEMO——鋅缺乏和SOD1二級(jí)結(jié)構(gòu)改變"。

◆抗體信息

■　關(guān)于克隆MS785與MS27的區(qū)別

●　MS785是以人SOD1的6~16氨基酸序列，MS27是以人SOD1的30~40氨基酸序列分別作為抗原制備的單抗。

●　均可廣泛地檢測(cè)突變體，但無法檢測(cè)到某些每個(gè)表位均有突變的特定突變體。

●　由于MS785和MS27有互補(bǔ)性，所以混合型抗體可以補(bǔ)全抗原位點(diǎn)突變體的檢測(cè)。

◆應(yīng)用

●　免疫沉淀，免疫染色：突變體檢測(cè)

●　ELISA：突變體檢測(cè)（詳細(xì)請(qǐng)參考原著文獻(xiàn)2。）

●　Western blot：同時(shí)檢測(cè)突變體與野生型

注意：在變性狀態(tài)下，不僅會(huì)檢測(cè)到SOD1突變體，也會(huì)檢測(cè)到野生型SOD1。因此，實(shí)驗(yàn)過程中必須防止蛋白變性，請(qǐng)勿使用SDS等變性劑。

◆原著文獻(xiàn)

1.　Fujisawa, et al., Ann. Neurol., 72, 739～749 (2012).

1.　"A novel monoclonal antibody reveals a conformational alteration shared by amyotrophic lateral

1.　sclerosis-linked SOD1 mutants."

2.　Fujisawa, et al., Neurobiol. Dis., 82, 478～486 (2015).

2.　"A systematic immunoprecipitation approach reinforces the concept of common conformational

1.　alterations in amyotrophic lateral sclerosis-linked SOD1 mutants."

◆通過免疫染色對(duì)SOD1突變體的檢測(cè)實(shí)例

在HEK293細(xì)胞表達(dá)野生型以及G93A突變體SOD1（FLAG融合蛋白），分別使用MS785、MS27以及MS785/MS27混合型抗體（紅）和抗FLAG抗體（綠）進(jìn)行免疫染色（工作濃度：1 μg/mL）。可以確認(rèn)，野生型以及G93A突變體均倍倍抗FLAG抗體檢測(cè)到信號(hào)，但是MS785、MS27以及MS785/27混合型抗體均不與野生型反應(yīng)，僅與突變體反應(yīng)。

◆缺鋅狀態(tài)下野生型SOD1的檢測(cè)實(shí)例

本抗體可檢測(cè)出缺鋅時(shí)野生型SOD1的動(dòng)態(tài)結(jié)構(gòu)變化。不僅ALS研究，也適用于SOD1的基礎(chǔ)研究。

●　本產(chǎn)品有在血清缺乏條件以及鋅螯合劑TPEN處理下檢測(cè)出內(nèi)源性野生型SOD1的檢測(cè)實(shí)例。

●　MS785、MS27以及混合物都可用于檢測(cè)。

鋅缺乏和SOD1立體構(gòu)造改變

OD1是擁有鋅離子的金屬蛋白。東京大學(xué)的一條教授等人明確，在缺鋅狀態(tài)下野生型SOD1會(huì)釋放鋅離子，改變二級(jí)結(jié)構(gòu)，并采取SOD1突變體相似的單體結(jié)構(gòu)。這種結(jié)構(gòu)變化，令原本不結(jié)合的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)性降解（ERAD）蛋白Derlin-1獲得結(jié)合能力，誘導(dǎo)了ER 應(yīng)激（內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激）。即使是野生型SOD1，本產(chǎn)品也能識(shí)別出缺鋅狀態(tài)下的立體結(jié)構(gòu)變化，檢測(cè)出缺乏鋅的SOD1。因此適用于SOD1基礎(chǔ)研究以及ER應(yīng)激研究。

參考文獻(xiàn)：

1.  Fujisawa, et al., Ann. Neurol., 72, 739～749 (2012).

1.  "A novel monoclonal antibody reveals a conformational alteration shared by amyotrophic lateral sclerosis-linked SOD1 mutants."

2. Homma, et al., Molecular Cell, 52, 75～86 (2013).

1.  "SOD1 as a Molecular Switch for Initiating the Homeostatic ER Stress Response under Zinc Deficiency."

3. Fujisawa, et al., Neurobiol. Dis., 82, 478～486 (2015).

1.  "A systematic immunoprecipitation approach reinforces the concept of common conformational alterations in amyotrophic lateral sclerosis-linked SOD1 mutants."

將HEK293細(xì)胞用10 μM鋅螯合劑TPEN處理8小時(shí)。細(xì)胞裂解后，分別使用MS785、MS27以及MS785/MS27混合抗體進(jìn)行免疫沉淀。由于鋅離子的缺失，內(nèi)源性野生型SOD1與SOD1突變體同樣被MS785、MS27檢測(cè)出來。

◆儲(chǔ)存溫度

20°C

※ 本頁面產(chǎn)品僅供研究用，研究以外不可使用。