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簡要描述：本試劑盒是可用于細胞培養上清和體液樣本中細胞外囊泡的定性分析以及定量分析的酶聯免疫試劑。
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| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 一個月 |
|---|
本試劑盒是可用于細胞培養上清和體液樣本中細胞外囊泡的定性分析以及定量分析的酶聯免疫試劑。將能與細胞外囊泡表面的磷脂酰si氨酸（PS）特異性結合的蛋白質預包被到板上，細胞外囊泡與其反應被固定后，以目的細胞外囊泡表面標記蛋白的sheng物素標記抗體作為檢測一抗，以試劑盒中的HRP標記鏈霉親和素為二抗，可高靈敏度檢測表面具有靶標記蛋白的細胞外囊泡。同時，可用不同物種的sheng物素標記抗體作為檢測一抗。此外，二抗采用HRP標記鏈霉親和素，與血液成分的非特異性結合低，可高靈敏度檢測血液樣本中的細胞外囊泡。
◆特點
● 高靈敏度和定量檢測
可以直接檢測樣本中的細胞外囊泡（無需分離）
可以從2.5 μL左右的血液樣本中檢測細胞外囊泡（節約樣本）
靈敏度是WB法的50~1000倍（檢測微量信號）
● 應用廣泛
可定性或定量檢測培養上清和血液樣本中的細胞外囊泡
測定EV-depleted FBS中殘留的細胞外囊泡數量
使用凝集素分析外泌體的糖鏈
● 通用的sheng物素標記檢測方法
一抗可靈活更換成不同動物來源的抗體或凝集素等的sheng物素標記一抗
● 操作簡單以及再現性高
優化細胞外囊泡檢測用的試劑盒和試劑
◆檢測原理
FUJIFILM Wako試劑盒PS Capture™ Exosome ELISA Kit（Anti Mouse IgG POD）（Code No. 297-79201）（圖右）中，一抗使用小鼠抗體，二抗使用抗小鼠IgG抗體，但是本試劑盒（圖左），使用sheng物素標記抗體作為一抗，二抗使用HRP標記的鏈霉親和素。因此，可以不受限于抗體種類分析細胞外囊泡。
◆試劑盒組成
試劑盒組成（96次用） | 容量 |
Exosome Capture 96 Well Plate | 1塊（8 well×12 strips） |
Reaction Buffer | 80 mL×1支 |
Washing Buffer (10×) | 100 mL×1支 |
Exosome Binding Enhancer (100×) | 10 mL×1支 |
Control Biotinylated Antibody Anti-CD63 (100×) | 120 μL×1支 |
HRP-conjugated Streptavidin (100×) | 240 μL×1支 |
TMB Solution | 12 mL×1支 |
Stop Solution | 12 mL×1支 |
Plate Seal | 4塊 |
使用說明書 | 1份 |
◆對應樣本
樣本 | 定性分析 | 定量分析 |
細胞培養上清液 | 可以實現○ | 可以實現○ |
體液樣本 | 可以實現○ | 可以實現○ |
◆數據
■ 血液樣本以及培養上清液樣本的稀釋線性（Linearity）
用從COLO201細胞培養上清液中純化的細胞外囊泡制成的標準曲線為基準，檢測①人血清稀釋樣本，②人肝素血漿稀釋樣本，③人EDTA血漿稀釋樣本（各2個樣本，稀釋4次）以及④COLO201細胞培養上清液稀釋4次的樣本中的外泌體濃度（檢測CD63），評價各個樣本的稀釋線性。
結果表明，在CD63檢測中，血清和肝素血漿樣本在雙倍稀釋或更高稀釋度下可獲得良好的線性。EDTA血漿樣本在5倍以上稀釋度下可獲得良好的線性。
■ PS親和法和抗體法的比較（捕獲EVs的能力）
將預處理※1的各個細胞培養上清液分別添加至已固相化的抗CD抗體（CD9, CD63, CD81）或Tim4微孔板的各個孔中進行反應。然后，用各個sheng物素標記抗CD抗體（CD9, CD63, CD81）檢測結合的外泌體。
※1 預處理條件: 10,000×g, 30分
PS親和法與抗體法相比，更高效率地捕抓到了各種細胞株來源的外泌體
■ 測定市面上“無外泌體血清"中殘留的外泌體數量
用sheng物素標記抗CD9抗體※4檢測未處理的FBS，市場上售賣的“無外泌體血清"（ EV-depleted FBS）以及超離處理的FBS（UC-treated FBS）※3 中殘存的外泌體。
※3 超離條件：160,000×g, 16 h
※4 用Biotin Labeling Kit-SH（產品編號：348-90941）標記抗CD9抗體（產品編號：014-27763）。
Capture: Tim4 / Detection：sheng物素標記抗CD9抗體
使用PS親和法的ELISA系統，可以簡單便利地檢測到外泌體殘留量。
■ 應用于糖鏈分析：rBC2LCN凝集素和Tim4的雙抗夾心ELISA
用sheng物素標記抗CD63抗體（產品編號：019-27713）和sheng物素標記rBC2LCN凝集素※6檢測預處理完成※5的5倍稀釋iPS細胞培養上清液中的外泌體。
※5 預處理條件: 10,000 × g, 30 min
※6 用 EZ-Link™ Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin（ThermoFisher公司）標記rBC2LCN（產品編號：029-18061）。
捕獲用抗體: Tim4 / 檢測用抗體: 各sheng物素標記體
＜參考文獻＞ S. Saito, et al., Sci. Rep., 8, 3997 (2018)
通過與各種凝集素相組合，可應用于外泌體表面上的糖鏈分析。
■ 檢測人正常血液樣本中外泌體標記物的相對濃度
準備人血清（10個樣本），EDTA血漿（9個樣本）和肝素血漿（9個樣本）作為正常血液樣本，檢測外泌體標記物CD63和CD9，以及被認為是癌細胞外泌體特異性標記物的EpCAM。
結果顯示，在各個血液樣本中均檢測出了外泌體標記物CD63和CD9，但只有在癌細胞外泌體中才檢測出極微量的表面抗原EpCAM。
■ COLO201來源純化外泌體的添加回收測試
準備混合血清，EDTA血漿，肝素血漿的2倍稀釋液，并添加從COLO 201細胞培養上清中提取的3種濃度的COLO201來源外泌體，以EpCAM檢測來確認回收率。
在EpCAM檢測中，添加回收率在100％±10％的范圍內，顯示出良好的回收性能※。
※ 考慮到【血液檢體的稀釋線性】，EDTA血漿樣本建議稀釋5倍以上進行檢測。
◆抗外泌體標記抗體系列
產品編號 | 產品名稱 | 交叉反應 | 包裝 |
014-27763 | Anti CD9, Monoclonal Antibody (1K) 抗CD9單克隆抗體（1K） | 人，牛 | 100 µL |
012-27063 | Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13) 抗CD63，單克隆抗體（3-13） | 人 | 100 µL |
011-27773 | Anti CD81, Monoclonal Antibody (17B1) 抗CD81單克隆抗體（17B1） | 人，牛 | 100 µL |
產品編號 | 產品名稱 | 偶聯基團 | 包裝 |
014-27643 | Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13), Fluorescein Conjugated 抗CD63，單克隆抗體（3-13），熒光素結合 | 綠色熒光素 | 100 次用 |
011-27751 | Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13), Red Fluorochrome(635) Conjugated | 紅色熒光素 | 25 次用 |
017-27753 | 100 次用 | ||
019-27713 | Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13), Biotin Conjugated 抗CD63單克隆抗體（3-13），sheng物素偶聯 | sheng物素 | 100 µL |
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PS Capture™ 外泌體ELISA試劑盒（抗小鼠IgG POD）
| 產品編號 | 產品名稱 | 產品規格 | 產品等級 | 備注 |
| 298-80601 | PS Capture™ 外泌體ELISA試劑盒（鏈霉親和素HRP） PS Capture™ Exosome ELISA Kit （Streptavidin HRP） | 96 tests | 基因研究用 | - |
| 產品編號 | 產品名稱 | 產品規格 | 產品等級 | 備注 |
| 014-27763 | Anti CD9, Monoclonal Antibody (1K) 抗CD9單克隆抗體（1K） | 100 µL | - | - |
| 012-27063 | Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13) 抗CD63，單克隆抗體（3-13） | 100 µL | - | - |
| 011-27773 | Anti CD81, Monoclonal Antibody (17B1) 抗CD81單克隆抗體（17B1） | 100 µL | - | - |
| 014-27643 | Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13), Fluorescein Conjugated 抗CD63，單克隆抗體（3-13），熒光素結合 | 100 tests | - | - |
| 011-27751 | Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13), Red Fluorochrome(635) Conjugated 抗CD63單克隆抗體（3-13），紅色熒光染料（635）偶聯 | 25 tests | - | - |
| 017-27753 | Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13), Red Fluorochrome(635) Conjugated 抗CD63單克隆抗體（3-13），紅色熒光染料（635）偶聯 | 100 tests | - | - |
| 019-27713 | Anti CD63, Monoclonal Antibody (3-13), Biotin Conjugated 抗CD63單克隆抗體（3-13），sheng物素偶聯 | 100 μL | - | - |
| 產品編號 | 產品名稱 | 產品規格 | 產品等級 | 備注 |
| 294-84101 | MagCapture™ 外泌體提取試劑盒PS MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS | 2 tests | 基因研究用 | - |
| 290-84103 | MagCapture™ 外泌體提取試劑盒PS MagCapture™ Exosome Isolation Kit PS | 10 tests | 基因研究用 | - |
| 297-79201 | PS Capture™ 外泌體ELISA 試劑盒（抗小鼠IgG POD） PS Capture™ Exosome ELISA Kit （Anti Mouse IgG POD） | 96 tests | 基因研究用 | - |
| 297-79701 | PS Capture™外泌體流式試劑盒 PS Capture™ Exosome Flow Cytometry Kit | 300 tests | 基因研究用 | - |
| 012-27063 | 抗CD63，單克隆抗體（3-13） Anti CD63, Monoclonal Antibody （3-13） | 100 uL | 免疫化學用 | - |
| 012-27063 | 抗CD63，單克隆抗體（3-13） Anti CD63, Monoclonal Antibody （3-13） | 100 μL | 免疫化學用 | - |
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