EV-Save™ 細(xì)胞外囊泡保存穩(wěn)定劑

實(shí)驗(yàn)中導(dǎo)致外泌體等細(xì)胞外囊泡（EV: Extracellular Vesicle）減少的原因多種多樣，其中，對(duì)樣品管等實(shí)驗(yàn)耗材的吸附是EV損失的主要原因，EV研究的指南《MISEV2023》中也指出，純化后的EV易吸附于儲(chǔ)存容器^1）。使用蛋白質(zhì)低吸附管可有效防止EV吸附樣品管^2-3），但實(shí)驗(yàn)中使用的塑料制品不止樣品管，還有移液器槍頭和離心管等，要將這些耗材全部替換為低吸附耗材并不容易。

添加保存穩(wěn)定劑至樣品或純化EV溶液中在可操作性和多功能性方面提供了出色的解決方案。FUJIFILM Wako開(kāi)發(fā)的EV-Save™ 細(xì)胞外囊泡保存穩(wěn)定劑（產(chǎn)品編號(hào)：058-09261）僅需添加至樣品或純化EV溶液中，即可抑制樣品管、移液器槍頭和離心管上的吸附。另外，本產(chǎn)品也具有保護(hù)EV免受凍融損傷的作用。FUJIFILM Wako還提供專(zhuān)用于動(dòng)物給藥和通過(guò)TFF純化EV的EV-Save™ 系列產(chǎn)品。

產(chǎn)品陣容

◆EV-Save™ 細(xì)胞外囊泡保存穩(wěn)定試劑（超濾用）

本產(chǎn)品是一款可抑制EV吸附于樣品管或移液槍槍頭等實(shí)驗(yàn)耗材的聚合物試劑。可抑制實(shí)驗(yàn)中以及保存過(guò)程中產(chǎn)生的EV損失，從而提高回收率。此外，它還具有保護(hù)EV免受凍融傷害的效果。建議在EV的過(guò)濾、純化和保存前添加本產(chǎn)品至樣品中。

特點(diǎn)

● 抑制樣品管和移液器槍頭等的EV吸附

● 保護(hù)EV免受反復(fù)凍融的損傷

● 操作簡(jiǎn)便，僅需將EV-Save™（超濾用）直接添加至樣品或純化EV溶液中即可

推薦樣品

● 細(xì)胞培養(yǎng)上清

● 純化EV溶液

※ 在血清、血漿和干擾物質(zhì)含量高的樣品中，難以獲得理想的防吸附效果。

對(duì)實(shí)驗(yàn)分析的影響

已確認(rèn)添加EV-Save™不影響以下實(shí)驗(yàn)的外泌體分析：

-   Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)

-    WB

-   ELISA

-   微陣列

-    細(xì)胞培養(yǎng)

※ EV-Save™（超濾用）（產(chǎn)品編號(hào)：058-09261）含有聚合物。若聚合物會(huì)影響后續(xù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，請(qǐng)勿使用本產(chǎn)品。

數(shù)據(jù)

▼吸附抑制效果

▼冷凍保護(hù)效果

添加EV-Save™（超濾用）至使用PS親和法純化的COLO201細(xì)胞來(lái)源EV后進(jìn)行凍融。使用PS Capture™ Exosome ELISA Kit (Anti Mouse IgG POD)檢測(cè)樣品管內(nèi)的EV含量（CD63信號(hào)），使用透射電子顯微鏡分析EV的形態(tài)。

（1）ELISA	（2）電子顯微鏡
【結(jié)果】 未添加EV-Save™（超濾用）的樣品凍融后，CD63信號(hào)減弱。但通過(guò)添加EV-Save™（超濾用）可抑制凍融引起的信號(hào)減弱。電子顯微鏡下也可以觀察EV-Save™（超濾用）抑制了粒子數(shù)的減少。

◆EV-Save™ 細(xì)胞外囊泡保存穩(wěn)定劑（in vivo 用）

本產(chǎn)品的組成成分僅使用具有藥物添加劑實(shí)例的成分，是一款可用于EV給藥實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的EV吸附抑制劑和冷凍保護(hù)劑。

特點(diǎn)

● 抑制樣品管和移液器槍頭等的EV吸附

● 保護(hù)EV免受反復(fù)凍融的損傷

● 操作簡(jiǎn)便，僅需將EV-Save™直接添加至樣品或純化EV溶液中即可

● 組成成分使用可排出體外的分子量以及具有藥物添加劑實(shí)例的成分

推薦樣品

● 細(xì)胞培養(yǎng)上清

● 純化EV溶液

※ 在血清、血漿和干擾物質(zhì)含量高的樣品中，難以獲得理想的抗吸附效果

對(duì)實(shí)驗(yàn)分析的影響

已確認(rèn)添加EV-Save™不影響以下實(shí)驗(yàn)分析的外泌體分析：

-  Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)

-  WB

-  ELISA

-  微陣列

-  細(xì)胞培養(yǎng)

※ 超濾時(shí)請(qǐng)選擇EV-Save™（超濾用）（產(chǎn)品編號(hào)：058-09261）

數(shù)據(jù)

▼吸附抑制效果

▼冷凍保護(hù)效果

◆EV-Save™ 細(xì)胞外囊泡保存穩(wěn)定劑（TFF用）

切向流過(guò)濾法（TFF）作為一種高效的方法被用于細(xì)胞外囊泡（EV）濃縮和緩沖液置換。TFF通過(guò)將樣品與濾膜平行流動(dòng)來(lái)防止樣品在濾膜上堆積，盡可能地減少樣品損失。另外，EV等易吸附的樣品由于膜吸附和過(guò)濾操作中的物理應(yīng)力，回收率可能會(huì)降低。

本產(chǎn)品旨在通過(guò)減輕TFF處理過(guò)程中的物理應(yīng)力以及膜的吸附來(lái)提高EV回收率。使用本產(chǎn)品可實(shí)現(xiàn)高效、穩(wěn)定的EV回收。

特點(diǎn)

● 抑制使用TFF進(jìn)行EV純化、濃縮和緩沖液置換過(guò)程中的EV損傷和EV對(duì)濾膜的吸附

● 操作簡(jiǎn)便，僅需向樣品添加本產(chǎn)品和平衡緩沖液

● 本產(chǎn)品可防止因吸附于試管而導(dǎo)致的EV損失，并防止凍融損傷，過(guò)濾后(TFF)的EV溶液可以直接保存。

 （注：僅在緩沖液交換過(guò)程中添加本產(chǎn)品才能達(dá)到此效果）

推薦樣品

● 純化的EV

● 細(xì)胞培養(yǎng)上清

※ 在血清、血漿和雜志含量高的樣品中，難以獲得理想的防吸附效果。

性能數(shù)據(jù)

▼提高緩沖液置換過(guò)程中純化的 EV 的回收率

使用MassivEV™ EV Purification Column PS（產(chǎn)品編號(hào)：131-19491）從骨髓來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞（BMMSC）和脂肪組織來(lái)源間充質(zhì)干細(xì)胞（ADMSC）的細(xì)胞培養(yǎng)上清中純化EV。然后，使用Repligen的TFF系統(tǒng)，更換添加了本產(chǎn)品1/100量的HBS 緩沖液進(jìn)行緩沖液交換。使用PS Capture™ 外泌體ELISA試劑盒（鏈霉親和素HRP）（產(chǎn)品編號(hào)：298-80601，檢測(cè)抗體使用抗CD63或抗CD81抗體），評(píng)估緩沖液置換后的EV回收率。，EV粒子粒徑分布則使用Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)進(jìn)行檢測(cè)。

（1）ELISA

【結(jié)果】

通過(guò)添加本產(chǎn)品，可以觀察到基于TFF置換緩沖液中EV的回收率升高。

（2）NTA

【結(jié)果】

添加本產(chǎn)品后，純化EV粒子粒徑分布并未觀察到明顯變化。

▼提高基于TFF從細(xì)胞培養(yǎng)上清中純化EV的回收率

使用TFF將細(xì)胞培養(yǎng)上清濃縮20倍，然后用100倍的緩沖液進(jìn)行置換。將本品以1/100的量添加至細(xì)胞培養(yǎng)上清液和置換緩沖液中。使用CD63和CD81的ELISA試劑盒檢測(cè)EV的回收率，使用Nanoparticle Tracking Analysis (NTA)檢測(cè)EV粒子粒徑分布。

(1) ELISA

【結(jié)果】

通過(guò)添加本產(chǎn)品，可以觀察到從細(xì)胞上清中純化EV的回收率有所提升。

(2) NTA

【結(jié)果】

添加本產(chǎn)品后， EV的粒子粒徑分布并未觀察到明顯變化。

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